微生物菌種的培養與保藏方法分享

微生物菌種可以彌補常規飼料中容易缺乏的氨基酸，還能使其它粗飼料原料營養成份迅速轉化，達到增強消化吸收利用效果。下面分享微生物菌種的培養：

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業發酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經過擴大培養成為具有一定數量和質量的純生產菌種的制備過程。以作接入發酵罐中進一步擴大菌體量及合成產物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備\菌種制備 ，其中(1)～(4)為孢子制備過程。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產菌種，用無菌手續挑取少許，接入瓊脂斜面培養基上，在25℃（或較高溫度）下培養5～7天（或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數采用大米、小米之類的天然培養基）。

5、將培養成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養基上，于25～28℃培養14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產上延續使用半年左右。
放線菌孢子的培養基大多是采用麩皮或豌豆浸出液及無機鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴大的扁瓶孢子培養基中,于28～37℃培養5～14天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐(6)的種子。

6、如果有些生產菌種不產孢子，如赤霉素產生菌或產孢子不多的，則可采用搖瓶(5)液體培養制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養基組分應是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發酵罐(7)的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

  菌種保藏是指保持微生物菌株的活力和遺傳性狀的技術。微生物在使用和傳代過程中容易發生污染、變異甚至死亡，因而常常造成菌種的衰退。菌種保藏的目的就是使菌株存活、不丟失、不污染雜菌、不發生或少發生變異，保持菌種原有的活性和各種特征。菌種保藏的基本原理是使微生物的生命活動處于半永jiu性的休眠狀態，也就是將微生物的新陳代謝作用限制在ZUI第低范圍內。

實驗室常用的保菌方法有：甘油保菌法、斜面保菌法、穿刺保菌法、液體石蠟覆蓋保藏法、沙土保藏法、冷凍干燥法。微基生物在以上幾種菌種保藏方法的基礎上，開發出了保菌效果更好瓷珠保菌法。

一、甘油保菌法

此方法適用于菌種的中長期保藏，保藏時間可在1年以上。由于甘油本身十分粘稠，很難定量，因此一般將甘油和生理鹽水按1:1的比例配成終濃度為50%的甘油溶液。使用時，按50%甘油：菌液=1:1的比例混合，使甘油終濃度在20-30%即可，甘油濃度過高或過低都不利于菌種保藏。將甘油菌種轉移至-80℃冰箱長期凍存。需要取用菌種的時候，將凍存管放在37℃水浴中快速解凍，直到菌種wang全融化，此時可取出菌種進行實驗。

此方法適用范圍廣，操作簡單，保藏期長，菌種不容易發生變異。

二、斜面保菌法

將菌種接種在適宜的固體斜面培養基上，待菌充分生長后轉移至4℃冰箱中保藏。保藏的時間根據微生物的種類而不同，一般霉菌、放線菌及產芽孢的細菌保存2-4個月就需要移種一次，酵母菌為兩個月，而細菌最好一個月移種一次。需要取用菌種的時候，可用接種環在斜面上挑取少量菌體進行接種。

此方法的優點是操作簡單，使用方便，不需特殊設備，能隨時檢查所保藏的菌株是否死亡、變異或污染雜菌等。缺點是保藏期短，菌種容易變異，因為培養基的物理和化學性質不是嚴格恒定的，屢次傳代會使微生物的代謝發生改變，且此方法污染雜菌的機會較高。

三、穿刺保菌法

準備一管半固體培養基，用接種針挑取菌種，自半固體培養基的中心垂直刺入，直至接近試管底部，但不要穿透，然后沿原穿刺線將接種針退出，于4℃冰箱保存。此方法同斜面保菌法一樣需要定期移種。

四、液體石蠟覆蓋保藏法

此方法是斜面保菌的輔助方法。將菌種接種在適宜的固體斜面培養基上，待菌充分生長后注入無菌液體石蠟，使其覆蓋整個斜面，再直立放置在4℃冰箱中保藏。液體石蠟可防止因培養基水分蒸發而引起菌種死亡，同時可以讓菌體與空氣隔絕，減弱菌種的代謝作用，延長保藏時間。需要取用菌種時，用接種環從斜面上挑取少量菌種即可。

此方法的優點是操作簡單，不需要特殊的設備，且不需要頻繁移種，保藏時間較長。缺點是保存時必須直立放置，占用空間較大。

五、沙土保藏法

將培養好的菌種與無菌沙土混合，使菌體吸附在沙土載體上，干燥后轉移至4℃冰箱保存。需要取用菌種的時候，取出少量沙土顆粒即可。

此方法操作簡單，菌種的保藏時間長。

六、冷凍干燥法

將菌種冷凍，在減壓下利用升華作用去除水分，使細胞的生理活動趨于停止，從而使菌種長期維持存活的狀態。需要取用菌種的時候，用無菌水或培養基重懸菌體，將菌懸液轉移至固體培養基平板上進行培養。

此方法適用于菌體的長期保存，但是相關的設備和操作相對其他幾種保藏方法都比較復雜。

七、瓷珠保菌法

微基生物在以上幾種保藏方法的基礎上開發出了瓷珠保菌法，相對傳統的保藏方法保菌的效果更好，而且取用方便，可降低菌種因反復凍融而受到的傷害。

瓷珠凍存管中包含12顆磨砂瓷珠和菌種保存液。挑取對數生長期的菌種轉移至凍存管中，上下顛倒混勻，此時菌種會均勻分布在保存液中。用移液器吸出保存液，此時在表面張力的作用下，每顆瓷珠表面都會覆蓋一層保存液，而菌種就保存在這層保存液中。將含有菌種的凍存管轉移至-80℃冰箱即可長期凍存（一般可保存約1年）。

需要取用菌種時，從-80℃冰箱中取出凍存管，輕輕搖晃使瓷珠分散開，挑取一顆瓷珠接種至培養基平板上進行劃線培養，或接種至液體培養基中進行搖菌培養。接種完成后，迅速將凍存管放回冰箱中。

針對厭氧菌株，我們也能夠提供含有還原劑的厭氧性保存液，并對菌種采用真空包裝，避免菌種因接觸氧氣而死亡。

微生物菌種可以彌補常規飼料中容易缺乏的氨基酸，還能使其它粗飼料原料營養成份迅速轉化，達到增強消化吸收利用效果。下面分享微生物菌種的培養：

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業發酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經過擴大培養成為具有一定數量和質量的純生產菌種的制備過程。以作接入發酵罐中進一步擴大菌體量及合成產物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備\菌種制備 ，其中(1)～(4)為孢子制備過程。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產菌種，用無菌手續挑取少許，接入瓊脂斜面培養基上，在25℃（或較高溫度）下培養5～7天（或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數采用大米、小米之類的天然培養基）。

5、將培養成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養基上，于25～28℃培養14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產上延續使用半年左右。
放線菌孢子的培養基大多是采用麩皮或豌豆浸出液及無機鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴大的扁瓶孢子培養基中,于28～37℃培養5～14天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐(6)的種子。

6、如果有些生產菌種不產孢子，如赤霉素產生菌或產孢子不多的，則可采用搖瓶(5)液體培養制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養基組分應是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發酵罐(7)的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。